細胞培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)建于二十世紀初，歷經(jīng)一個多世紀的發(fā)展，現(xiàn)在已成為生命科學領(lǐng)域越來越重要的實驗技術(shù)之一。由于細胞的特殊性，在細胞培養(yǎng)過程中，或在細胞建株和建系過程中，隨著傳代次數(shù)的增加，細胞的各種生物特性都會逐漸發(fā)生變化。因此，原始細胞種子的及時保存就顯得尤為必要。在雜交瘤單抗的制備過程中，雜交瘤細胞以及克隆化得到的亞克隆細胞的凍存，是bi不可少的操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候，在細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等緣故而導致實驗失敗，如果沒有原始細胞的凍存，則將因為上述的意外而前功盡棄。除此之外，購買、交換和運送某些細胞也需要利用細胞凍存的形式來進行。因此，及時方便地進行細胞的凍存在實際工作中顯得十分必要。

細胞凍存要取得好的效果，多采用血清、甘油或二甲基亞砜(DMSO)等作為保護劑，最大限度的保存細胞活力。這些物質(zhì)有些能提高細胞膜對水的通透性，在緩慢冷凍過程中可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。同時，有些保護劑在細胞外也能減輕溶液中高濃度溶質(zhì)對細胞的損傷，進一步避免細胞在冷凍和復(fù)蘇過程中受到損傷。滲透性保護劑DMSO和非滲透性保護劑血清(主要含白蛋白)是使用最為廣泛，效果最為穩(wěn)定可靠的。

此外，采用“慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1到-2℃/分鐘，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。復(fù)蘇細胞采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。

現(xiàn)有凍存方法存在的問題:

1、DMSO對細胞存在一定的毒性，用量受到限制，降低或者不使用DMSO，尋找其它替代物是最hao的選擇。但是目前，該技術(shù)領(lǐng)域還未發(fā)現(xiàn)凍存保護效果能與DMSO媲美的物質(zhì)，因此，聯(lián)合其它成分，形成新的配方，降低DMSO的含量就成了較為現(xiàn)實的選擇。

2、血清，即使是純化得到的白蛋白，由于其動物來源的特性，會極大增加帶來病毒等感染物質(zhì)的可能。而且，血清來源受限，價格昂貴，所以其使用也必然會受到越來越多的限制。因此，尋找替代血清的非滲透性保護劑也顯得尤為必要。

3、目前，zui成熟和zui穩(wěn)定的凍存細胞技術(shù)是將加有保護劑的細胞懸液置于-196℃液氮中，這樣可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而保持細胞的特性，在需要的時候經(jīng)過復(fù)蘇程序，使得細胞重新生長增殖以用于實驗。細胞儲存在-196℃液氮中，理論上儲存時間是無限的，但是液氮凍存步驟繁瑣，需要經(jīng)過程序降溫，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜)，最后才移至液氮罐中進行長期的儲存。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量的死亡。)

市面上“無血清細胞凍存液"獲得了廣大科研工作者的喜愛。 而本公司提供的一種新的凍存液體系: 無血清低DMSO細胞凍存液78EC10001，不僅可以省卻對血清的使用，而且還顯著降低了DMSO的用量。同時，本專li細胞凍存液凍存的細胞懸液可以直接放置于-80℃冰箱，既不需要繁瑣的程序降溫或采用程序降溫儀，更不需要放置在-196℃液氮中，節(jié)省了大量時間和精力。該細胞凍存液通用于人和各種動物細胞株。特別配方(主要成分為5% DMSO和氨基酸)具有有效提高細胞凍存活率和復(fù)蘇活力。不含血清及動物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存，也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存。

產(chǎn)品特點:

1. 高安全性，不含血清及動物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。

2. 低DMSO，DMSO的含量為10%(v/v)，極大降低了對細胞潛在的毒性作用。

3. 細胞存活率高，無批次差異。

4. wan全凍存液配方，可直接使用，方便簡捷。

5. 可直接存放于-80℃冰箱凍存，無需經(jīng)過費時的程序降溫過程(省時、省力、省錢)，不需要采用程序降溫儀，更不需要放置在-196℃液氮。

6. 可原位凍存，比如雜交瘤細胞的亞克隆，可以大規(guī)模減少工作量，避免污染。

凍存效果對比:

圖1. 小鼠成纖維細胞3T3細胞復(fù)蘇后細胞狀態(tài)對比圖

對照B:存活率89% 本產(chǎn)品:存活率97%

圖2. 人胚腎細胞293E細胞復(fù)蘇后細胞狀態(tài)對比圖

對照B:存活率86% 本產(chǎn)品:存活率93%

注:對照A: DMEM培養(yǎng)基+10%血清+10%DMSO，液氮凍存;

對照B: 無血清細胞凍存液(DMSO 10% v/v);

附:通用細胞凍存液，無血清細胞凍存液、無血清低DMSO細胞凍存液的比較